免疫荧光 IF

实验原理

免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

样本运输保存

实验项目	标本要求	标本保存运输条件	可能存在风险	备注
石蜡切片	客户提供石蜡切片的，该切片放置时间不能超过半年	常温	放置超过了半年的石蜡切片存在抗原丢失的可能性，结果可能为阴性或阳性较低	如果有蜡块最好提供蜡块重新切片
冰冻切片	1. 厚度不要超过10um； 2. 提供的冰冻切片放置时间不能超过三个月；	-20℃	1.20um厚的冰冻切片，很容易掉片。 2、20um 厚的冰冻切片抗体不易进入导致假阴性结果 3. 放置超过三个月的冰冻切片，抗原丢失很严重。	1. 提供组织样品改做石蜡切片或者重新冰冻切片8-10um。 2. 放置超过三个月的切片建议重新切片
细胞爬片	1. 细胞密度合适（最好是105），状态要好。 2. 最好爬在24*24 的爬片上，不要把细胞直接爬在板子上，组化不接12 孔板或者孔径更小的培养板	4℃，只要不是一定要做活细胞的项目，建议固定好细胞，换成PBS 运输。	爬片操作过程中，细胞不可避免的会有少数脱落。如果原本细胞数量就少，那么做完后，可能会发现细胞没了。	1.超过一周的细胞爬片，可能长菌。爬片一次性做完，保存不超过一周。 2. 细胞数量：6 孔板细胞密度到达50%~70%。 3. 细胞没有制成爬片，直接长板孔，不能封片拍照。
细胞悬浮液，做滴片	细胞固定好，换成PBS，离心后要保证细胞沉淀至少肉眼可见	把细胞悬浮液用EP 管装着， 4℃保存运输	有的客户提供的细胞量太少，离心后，看不到明显沉淀，滴片制好后，发现没细胞	离心后需肉眼可见细胞沉淀。